Bezpośrednia detekcja immunofluorescencyjna

Dowody na obecność struktur tkankowych, przeciwciał i patogenów poprzez znakowanie immunologiczne są popularne, nowoczesne i dokładne. Immunofluorescencja odnosi się do znakowania immunologicznego przygotowanymi fluorescencyjnymi przeciwciałami, które mają świecić w świetle UV.

Na Bezpośrednia detekcja immunofluorescencyjna podłoże jest badane bezpośrednio za pomocą świecących przeciwciał, bez przeciwciał pierwotnych lub sztucznych antygenów.

Co to jest bezpośrednia detekcja immunofluorescencji?

Bezpośrednia detekcja immunofluorescencyjna jest metodą diagnostyczną opartą na wiedzy z zakresu immunologii, immunobarwienia i immunohistochemii. Skupiono się tutaj na zdolności przeciwciał do wiązania określonych punktów w tkance lub antygenów w surowicy. Te miejsca to epitopy.

W diagnostyce biochemicznej istnieją sztuczne przeciwciała lub mimetyki (liczba pojedyncza: mimetyczne), które umożliwiają znakowanie tych wiązań przeciwciało-antygen za pomocą fluorescencji lub radioaktywności. Koniugaty sztucznych przeciwciał z jednej strony wiążą się z epitopami, az drugiej strony posiadają marker fluorescencyjny w przypadku immunofluorescencji. Jest to alternatywa dla stosowania markerów radioaktywnych. Szczególną cechą bezpośredniego wykrywania immunofluorescencyjnego w porównaniu z detekcją pośrednią jest to, że przeciwciało, które wiąże się z epitopem antygenu w badanym materiale, również reprezentuje koniugat przeciwciała z markerem fluorescencyjnym. Do bezpośredniego wykrywania nie są potrzebne dodatkowe przeciwciała.

Fluoresceina, która świeci w świetle UV i izotiocyjanian fluoresceiny (FITC) są używane jako barwniki do wytwarzania koniugatów sztucznych przeciwciał w immunofluorescencji. Jak dotąd jest to nieco skomplikowane, ale bezpośrednie wykrywanie immunofluorescencji jest standardową metodą diagnostyki laboratoryjnej w wielu różnych kwestiach medycznych. Przeciwciała z barwnikiem fluorescencyjnym są gotowe do sprzedaży.

Funkcja, efekt i cele

Bezpośrednie wykrywanie immunofluorescencyjne jest dostępne do badań tkanek w celu wybarwienia określonych struktur w tkance. Ale są również dostępne dla pojedynczych komórek. Cytometria przepływowa odgrywa tutaj główną rolę. Wreszcie istnieją testy immunologiczne w fazie stałej i ciekłej. Badania immunofluorescencyjne tkanek mają szczególne znaczenie w onkologii, czyli leczeniu chorób nowotworowych.

Antygeny specyficzne dla guza w tkance guza można wykryć bezpośrednio za pomocą immunofluorescencji. Te badania próbek tkanek guzów są często ważne, aby dowiedzieć się, skąd w organizmie pochodzą istniejące przerzuty lub aby ocenić, czy guz jest łagodny, czy złośliwy. Badanie poszczególnych komórek metodą bezpośredniej detekcji immunofluorescencji służy do znalezienia antygenów wirusów, antygenów bakteryjnych i innych epitopów.

Na przykład możesz dowiedzieć się, czy komórki są zainfekowane wirusem i na jakim etapie cyklu infekcji znajdują się komórki. Nazwa FACS (= sortowanie komórek aktywowane fluorescencyjnie) to wysoce wydajna metoda cytometrii przepływowej, w której komórki oznaczone fluorescencją są rozprowadzane do różnych probówek w zależności od rodzaju koloru. Ta procedura jest ważna w immunologii, hematologii i chorobach zakaźnych.

Immunofluorescencyjne testy immunologiczne pozwalają na bezpośrednie wykrywanie toksyn środowiskowych, organizmów zmodyfikowanych genetycznie oraz niektórych dodatków w żywności. W tej konfiguracji eksperymentalnej zawsze występuje faza stała i ciekła. Liczne patogeny, w tym wirus HIV wywołujący AIDS, można również wykryć bezpośrednio. Jednak przy wykrywaniu chorób zakaźnych i autoimmunologicznych często chodzi raczej o wykrycie przeciwciał niż antygenów. Są to cząsteczki obronne utworzone przez układ odpornościowy organizmu. Zgodnie z przedstawioną tutaj definicją, takie dowody nie są więc bezpośrednimi dowodami, ponieważ przeciwciała fluorescencyjne nie łączą się bezpośrednio z własnymi antygenami organizmu, ale z antygenami układu testowego.

Te antygeny w zestawie doświadczalnym są z kolei połączone z własnymi przeciwciałami organizmu. Bezpośrednie wykrywanie immunofluorescencyjne w przypadku powszechnych infekcji, na przykład wirusów HIV i chlamydii, jest stosowane tylko w specjalnych testach wykrywania i potwierdzających. Istnieją testy na wiele innych chorób. W większości sytuacji pośrednie wykrywanie przeciwciał jest bardziej odpowiednie w przypadku chorób zakaźnych, ponieważ własny układ odpornościowy organizmu ma genialną zdolność zapamiętywania poprzednich infekcji. W innych sytuacjach bezpośrednie wykrywanie antygenów i pośrednie wykrywanie przeciwciał wzajemnie się uzupełniają. Te ostatnie pokazują, że infekcja wystąpiła już wcześniej, podczas gdy te pierwsze dostarczają dokładniejszych informacji o aktualnym stanie aktywności patogenu.

Tutaj znajdziesz swoje leki

Ryzyko, skutki uboczne i niebezpieczeństwa

W przypadku bezpośredniego wykrywania immunofluorescencji, podobnie jak w przypadku wszystkich dowodów medycznych, istnieją dwa zagrożenia: ryzyko fałszywego, dodatniego wyniku i ryzyko fałszywego, ujemnego wyniku. Fałszywe, pozytywne wyniki powodują dyskomfort psychiczny i duży stres dla pacjenta.

Dlatego do pozytywnych wyników dodaje się dodatkowe procedury testowe, zwłaszcza jeśli diagnoza prowadzi do drastycznych zmian w życiu. Ryzyko fałszywego, negatywnego wyniku polega na tym, że pacjent nie dowiaduje się o zagrożeniu dla własnego zdrowia, a być może nawet dla zdrowia publicznego w odpowiednim czasie. Dlatego dobrze jest przeprowadzić wiele badań i produkować i oferować na sprzedaż dużą liczbę różnych produktów do bezpośredniej detekcji immunofluorescencyjnej. Wraz z innymi bezpośrednimi i pośrednimi metodami wykrywania chorób i patologii zwiększa to dokładność diagnozy.

Bezpośrednia detekcja opiera się na koniugacie przeciwciała, który z jednej strony wiąże się z epitopami antygenów, az drugiej strony powoduje również fluorescencję. Taki produkt jest zatem używany tylko w jednym rodzaju procedury testowej i nie jest używany w innych typach procedur testowych.Jest to ważna różnica w procedurze w stosunku do wykrywania pośredniego, w którym przeciwciała fluorescencyjne są poprzedzone przeciwciałami pierwszorzędowymi do wiązania epitopu. Koniugat przeciwciała nadaje się zatem do różnych testów. Ta różnica proceduralna różni się od medycznej różnicy między pośrednim wykrywaniem przeciwciał a bezpośrednim wykrywaniem antygenów.